循环肿瘤细胞 (Circulating Tumor Cell, CTC) 


实体肿瘤中的某些肿瘤细胞可侵润血管(主动性内渗),脱落并进入血液循环系统形成循环肿瘤细胞 CTC 。其中,某些 CTC 可由血液带至某一特定器官处后,粘附、侵润并穿出血管(主动性外渗),最终形成新的肿瘤转移灶。肿瘤复发与肿瘤转移有着类似的过程。



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应用赛特 SE-i•FISH® 检测 CTC 及 CTEC


赛特生物与美国 Cytelligen 公司密切合作,在世界上首次成功将差相富集 (SE) 与免疫荧光染色-染色体荧光原位杂交 (FISH) 整合为独特的 SE-i·FISH 技术平台。该技术拥有国内外 CTC 分离、鉴别的两项国家发明专利 (ZL 2009 1 0137289.0,ZL 2011 1 0340544.9) ,可有效检测肿瘤患者或肿瘤动物模型中的 CTC、循环肿瘤血管内皮细胞 (Circulating Tumor Endothelial Cell, CTEC) 及其各种亚类细胞。SE-i·FISH 已被成功应用于以下多种 CTC CTEC 的相关临床检测。CTC 最近也已被纳入美国 NCCN AJCC 肿瘤分期指南。


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迄今为止,赛特生物团队已与上百家国内外知名医院、科研院所(如美国 UCLA、UCSD、Scripps、德国慕尼黑大学医学中心、北京协和医院、中国医学科学院肿瘤医院/中国国家癌症中心、北京大学肿瘤中心、上海华山医院、四川大学华西医院等)及多家制药公司密切合作,对近4万例涵盖各种实体肿瘤的大样本上进行临床验证,在 CTC 的临床应用(如肿瘤早诊、疗效快速评估、耐药与复发的实时性监测等)及 CTC 单细胞研究等领域取得了丰硕成果,在《Clinical Cancer Research》、《Science Advances》等多个国际著名杂志上发表了多篇 SCI 高分论文。国际顶级期刊“科学”杂志已将独特的赛特 SE-FISH 作为最具有代表性的 CTC 检测技术向全球读者进行了报道 (Science 2013, 341:415) 。由国家科技部、卫计委共同组建的肿瘤转化医疗平台,也将赛特生物的 SE-FISH 作为 CTC 的主要检测技术向国内外广大肿瘤界同行进行了推荐 (http://101.200.216.160:888/yyfw/285.jhtml


差相富集技术 (Subtraction Enrichment, SE)


差相富集技术的主要作用原理是应用与白细胞相结合的免疫磁珠及特殊密度的非血源性细胞分离介质快速、高效地去除血液中绝大多数的白细胞、红细胞及血浆蛋白,从而达到从人或肿瘤动物模型体液中有效富集非血源性肿瘤细胞的目的。


赛特免疫磁珠的高特异性:

由特殊工艺制备的 Cytelligen 赛特免疫磁珠偶联了多种抗白细胞抗体以确保对白细胞的最佳去除效果。该免疫磁珠上的抗体仅与血源性白细胞相结合,而与非血源性肿瘤细胞无交叉反应。磁珠表面的特殊包被工艺确保了免疫磁珠与各种细胞不发生非特异性粘附。


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因富集过程不依赖肿瘤细胞表面标示物的表达,故可通用于所有不同实体肿瘤来源的 CTC 富集。富集过程中由于避免使用抗体直接抓取细胞及避免使用低渗溶破法去除红细胞,所以富集后的肿瘤细胞维持了很好的自然状态及很高的生物活性,适于后续原代肿瘤细胞培养及一系列各种形态学与功能性的相关研究。此外,SE 也可以有效富集分离各种大小不同的 CTC 、细胞团(癌栓,circulating tumor microemboli, CTM)。差相富集技术从技术层面解决了以往常见的 CTC 捕获效率及捕获丰度较低的问题,具有“非依赖、全亚型、高捕获率、高活性”等特点。

       

各种 CTC 分离方法比较 


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SE-i•FISH® 技术有效区分、鉴别“细胞型循环肿瘤标志物”CTC  CTEC


为了确保高灵敏、高特异性地有效检测、分型各种 CTCCTEC,赛特生物将细胞内生物链三要素(核酸、蛋白及细胞形态)整体考量,开发出了 FISH 整合技术平台,以同步、原位检测细胞上的染色体核型、肿瘤标志物蛋白表型及细胞形态。 FISH 鉴别技术实现了对富集的 CTC 进行核酸水平和蛋白水平的同步、原位双重鉴定,将免疫荧光染色与染色体荧光原位杂交 (FISH) 进行了有效整合,使得 CTC 计数、核型分析、表型分析、分子分型一步到位。


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依据特定瘤标表达的有无、强弱及染色体的异常倍体特性,可以鉴别出具有不同临床意义(如耐药、肿瘤转移与复发等)的各种 CTCCTEC 亚类细胞。从而为进一步探索 CTCCTEC 及其亚类与肿瘤的预后、转移、耐药、复发等的相关性研究提供坚实的基础与可靠的依据。大量临床实验证明,相对于传统的细胞形态学检查或目前常规的 CK 染色判断 CTCFISH 具有其它方法无可比拟的一系列特殊优势。


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SE-i•FISH® 的独特技术优势


(1)方法简便、快捷、高效,适用于检测各种生物体液样本,如血液、胸水、腹水、骨髓、尿液、脑脊液、淋巴穿刺、宫颈涂片等
(2)不依赖于肿瘤细胞表面标示物的表达,可同步检测所有实体上皮肿瘤各种 CTCCTEC 及相应细胞团





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(3)根据染色体不同倍体数目、肿瘤标志物蛋白表达及细胞大小,可对 CTC 及 CTEC 进行亚类分型,从而锁定具有不同临床意义(如肿瘤进展、转移、耐药、复发等)的不同亚类细胞
(4)富集的细胞维持了极高生物活性,适于后续原代细胞培养
(5)FISH 鉴别出的 CTC 及 CTEC 亚类细胞适于后续单细胞测序





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